利用活性炭原位吸附在线分离提纯发酵液中丁醇、丙酮和乙醇的方法，属于生物技术领域，包括如下步骤：①培养丙酮丁醇乙醇生产菌；②发酵的同时利用活性炭在线原位吸附丁醇、丙酮和乙醇；③吸附结束后脱附冷凝回收，得到丁醇、丙酮和乙醇粗品，本发明有益效果为发酵效率高、分离提纯成本低。